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瓊脂糖凝膠純化回收試劑盒操作使用
點擊次數:2279 更新時間:2019-11-21

 

瓊脂糖凝膠純化回收試劑盒

Midi Purification Kit

 

產品信息:

試劑盒組成 保存      DH101-01      DH101-02

                       100 次       200 次

 

溶膠液 DD 室溫  50ml         100ml

                  25ml          25ml×2

 

漂洗液 WB 室溫   次使用前按說明加量乙醇

 

洗脫緩沖液 EB 室溫 15ml 15ml

吸附柱 EC 室溫 100 個 200 個

收集管(2ml) 室溫 100 個 200 個

產品介紹:

在高離序鹽存在的情況下,DNA的片斷選擇性的吸附于離心柱內的硅基質膜上,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,漂洗

液將引物、核苷酸、蛋白、酶等雜質去除,后用低鹽、高 pH 值的洗脫緩沖液將純凈 DNA從硅基質膜上洗脫。

產品特點:

1.離心吸附柱內硅基質膜全部采用進口特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復性好??朔藝a試劑盒膜質量不穩(wěn)定的弊端。

2.使用了溶膠液,不含傳統(tǒng)溶膠液的碘化納和高氯酸鹽,不抑制回收后酶切、連接克隆等下游反應。

3.溶膠液調制成為了黃顏色,便于觀察溶膠效果和監(jiān)測 pH 值變化從而達到理想結合效果,大大提高回收效率。

注意事項:

1.所有的溶液應該是澄清的,如果環(huán)境溫度低時溶液可能形成沉淀,此時不應該直接使用,可在 37℃水浴加熱幾分鐘,即可恢復澄清。使用前應該恢復到室溫。

2.儲存于低溫(4℃或者-20℃)會造成溶液沉淀,影響使用效果,因此運輸和儲存均在室溫下(15℃-25℃)進行。

3.避免試劑長時間暴露于空氣中產生揮發(fā)、氧化、pH 值變化,各溶液使用后應及時蓋緊蓋子。

4.溶膠液中含有刺激性化合物,操作時要戴乳膠手套,避免沾染皮膚,眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時,要立即用大量清水或者生理鹽水沖洗。

5.回收純化的DNA的片段一般在100bp到40kb之間,過長、過短片段的回收效率降低。

6.回收DNA的量和起始DNA的量、洗脫體積、DNA的片斷大小有關。一般1-20μg, 100bp-5kb的DNA片段,回收率可高達85%-95%。

7.切膠回收時,紫外燈觀察對DNA的片段有損壞作用,應該盡可能使用能量低的長波紫外線,并且盡可能的縮短紫外線下處理的時間。

8.pH值≤7.5時,吸附膜吸附DNA的效率高。如果切下來的凝膠中含有電泳緩沖液太多,造成溶膠后溶膠液pH偏高,會導致回收率降低。溶膠后,如果溶膠液依舊保持黃色,說明pH正常;如果變成橘紅色或者淡紫色,說明pH偏高,可在膠充分溶解后加5-10μl 3M醋酸鈉(pH5.2)將pH值調到5-7(黃色)。

9.洗脫液EB不含有螯合劑EDTA, 不影響下游酶切、連接等反應。也可以使用水洗脫, 但應該確保pH大于7.5, pH過低影響洗脫效率。用水洗脫,DNA的片段應該保存在-20℃。DNA片段如果需要長期保存,可以用TE緩沖液洗脫(10mM Tris-HCl,1mM EDTA, pH 8.0),但是EDTA可能影響下游酶切反應,使用時可以適當稀釋。

自備試劑:無水乙醇操作步驟:

提示:第yi次使用前請先在漂洗液 WB 中加入量無水乙醇,加入后請及時打鉤標記已加入乙醇,以免多次加入!

1.在長波紫外燈下,用干凈刀片將所需回收的 DNA 條帶切下,盡量切除不含 DNA 的凝膠,得到凝膠體積越小越好。

2.將切下的含有DNA條帶凝膠放入 1.5ml離心管,稱重。

3.加3倍體積溶膠液DD。(凝膠重為 100mg,則加入300μl溶膠液)

如果凝膠濃度大于 2%,應加入6倍體積溶膠液。

4.56℃水浴放置 10min(或直至膠*溶解)。每 2-3min 渦旋震蕩一次加速溶解。

5.可選,:每 100mg初的凝膠重量加入150μl的異丙醇,震蕩混勻。

6.將上一步所得溶液加入吸附柱EC中(吸附柱放入收集管中),室溫放置 1min,12,000rpm離心30-60sec,倒掉收集管中的廢液。

7.加入500μl漂洗液WB(請先檢查是否已加入無水乙醇!),12,000rpm離心 30sec,棄掉廢液。

8.重復操作步驟 7。

9.將吸附柱EC放回空收集管中,12,000rpm 離心 2min,盡量去除漂洗液,以免漂洗液中殘留的乙醇抑制下游反應。

10 取出吸附柱 EC,放入一個干凈的離心管中,室溫放置數分鐘。

11.在吸附膜的中間部位滴加洗脫緩沖液EB(洗脫緩沖液事先在 65-70℃水浴中加熱效果更好),室溫放置2min,12,000rpm離心

1min。如果需要較多量DNA,可將得到的溶液重新加入吸附柱中,離心 1min。(注意:洗脫體積不應小于 30μl,體積過少影響回收效率)

 

 

瓊脂糖凝膠純化回收試劑盒說明書

伊紅染色液(水溶,5%)l

姬姆薩染色液(Giemsa Stain,即用型)

滬公網安備 31011802001676號

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